Vi delte flere overvejelser i sidste uge for at bruge celluloseacetatmembranelektroforese, og vi vil afslutte dette emne her i dag til din reference.
Udvalg af Bufferkoncentration
Bufferkoncentrationen anvendt i celluloseacetatmembranelektroforese er generelt lavere end den, der anvendes ved papirelektroforese.Den almindeligt anvendte pH 8,6Barbitalbuffer vælges typisk inden for området fra 0,05 mol/L til 0,09 mol/L.Ved valg af koncentration foretages en foreløbig bestemmelse.For eksempel, hvis længden af membranstrimlen mellem elektroderne i elektroforesekammeret er 8-10 cm, kræves der en spænding på 25V pr. centimeter membranlængde, og strømintensiteten skal være 0,4-0,5 mA pr. centimeter membranbredde.Hvis disse værdier ikke opnås eller overskrides under elektroforese, bør bufferkoncentrationen øges eller fortyndes.
En for lav bufferkoncentration vil resultere i en hurtig bevægelse af båndene og en stigning i båndbredden.På den anden side vil en for høj bufferkoncentration bremse båndmigreringen, hvilket gør det vanskeligt at skelne visse separationsbånd.
Det skal bemærkes, at ved celluloseacetatmembranelektroforese ledes en betydelig del af strømmen gennem prøven, hvilket genererer en betydelig mængde varme.Nogle gange kan den valgte bufferkoncentration anses for passende.Men under forhold med øget miljøtemperatur eller ved brug af højere spænding, kan fordampningen af vand på grund af varmen intensiveres, hvilket resulterer i en for høj bufferkoncentration og endda få membranen til at tørre ud.
Prøvevolumen
I celluloseacetatmembranelektroforese bestemmes mængden af prøvevolumen af forskellige faktorer, herunder elektroforesebetingelser, egenskaber af selve prøven, farvningsmetoder og detektionsteknikker.Som et generelt princip gælder det, at jo mere følsom påvisningsmetoden er, jo mindre kan prøvevolumenet være, hvilket er fordelagtigt til adskillelse.Hvis prøvevolumenet er for stort, er de elektroforetiske adskillelsesmønstre muligvis ikke klare, og farvning kan også være tidskrævende.Når man kvantitativt analyserer de adskilte farvede bånd ved hjælp af elueringskolorimetriske detektionsmetoder, bør prøvevolumenet ikke være for lille, da det kan resultere i lavere absorbansværdier for visse komponenter, hvilket fører til højere fejl i beregningen af deres indhold.I sådanne tilfælde bør prøvevolumenet øges passende.
Typisk varierer prøvevolumenet tilsat på hver centimeter af prøvepåføringslinjen fra 0,1 til 5 μL, svarende til en prøvemængde på 5 til 1000 μg.Ved rutinemæssig serumproteinelektroforeseanalyse overstiger f.eks. prøvevolumenet på hver centimeter af påføringslinjen generelt ikke 1 μL, svarende til 60 til 80 μg protein.Men når man analyserer lipoproteiner eller glycoproteiner ved hjælp af den samme elektroforesemetode, skal prøvevolumenet øges tilsvarende.
Som konklusion bør det mest egnede prøvevolumen vælges baseret på specifikke forhold gennem en række foreløbige eksperimenter.
Valg af farveopløsning
De adskilte bånd i celluloseacetatmembranelektroforese farves typisk før detektion.Forskellige prøvekomponenter kræver forskellige farvningsmetoder, og farvningsmetoderne, der er egnede til celluloseacetatmembranelektroforese, er muligvis ikke helt anvendelige på filterpapir.
Der er tre hovedprincipper at vælge farvningsløsning tilcelluloseacetatmembran.For det første,Vandopløselige farvestoffer bør foretrækkes frem for alkoholopløselige farvestoffer for at undgå membrankrympning og deformation forårsaget af sidstnævntes farveopløsning.Efter farvning er det vigtigt at skylle membranen med vand og minimere farvningens varighed.Ellers kan membranen blive krøllet eller krympet, hvilket vil påvirke den efterfølgende påvisning.
For det andet er det at foretrække at vælge farvestoffer med stærk farvningsaffinitet til prøven.I celluloseacetatmembranelektroforese af serumproteiner anvendes aminosort 10B almindeligvis på grund af dets stærke farvningsaffinitet til forskellige serumproteinkomponenter og dets stabilitet.
For det tredje bør pålidelige kvalitetsfarvestoffer vælges.Nogle farvestoffer kan, på trods af at de har samme navn, indeholde urenheder, der resulterer i en særlig mørk baggrund efter farvning.Dette kan endda sløre de oprindeligt godt adskilte bånd, hvilket gør dem svære at skelne.
Endelig er valget af farveopløsningskoncentration vigtigt.Teoretisk set kan det se ud til, at en højere koncentration af farveopløsning ville føre til mere grundig farvning af prøvekomponenter og bedre farvningsresultater.Dette er dog ikke tilfældet.Bindingsaffiniteten mellem prøvekomponenterne og farvestoffet har en vis grænse, som ikke øges med stigningen i farveopløsningskoncentrationen.Tværtimod spilder en for høj farveopløsningskoncentration ikke kun farvestoffet, men gør det også vanskeligt at opnå en klar baggrund.Når farveintensiteten når en vis maksimumværdi, følger farvestoffets absorbanskurve desuden ikke et lineært forhold, især ved kvantitative målinger. Ved celluloseacetatmembranelektroforese er farveopløsningskoncentrationen generelt lavere end den, der anvendes ved papirelektroforese.
Detaljer at vide om Beijing Liuyi Bioteknologi's celluloseacetatmembranelektroforesetank og dens elektroforeseapplikation, besøg venligst her:
lEksperiment for adskillelse af serumprotein med celluloseacetatmembran
lCelluloseacetatmembranelektroforese
lFlere overvejelser bør tages i betragtning, når du bruger celluloseacetatmembranelektroforese (1)
Hvis du har en købsplan for vores produkter, så tøv ikke med at kontakte os.Du kan sende os en besked på e-mail[e-mailbeskyttet]eller[e-mailbeskyttet], eller ring til os på +86 15810650221 eller tilføj Whatsapp +86 15810650221 eller Wechat: 15810650221.
Reference:Electrophoresis (anden udgave) af Mr. Li
Indlægstid: Jun-06-2023