Princip
Celluloseacetatfilmelektroforese er en elektroforesemetode, der anvender en celluloseacetatfilm som støtte.Fænomenet, hvor ladede partikler bevæger sig mod den modsatte elektrode under påvirkning af et elektrisk felt, kaldes elektroforese.Da hvert protein har et specifikt isoelektrisk punkt, vil proteinet være positivt ladet og bevæge sig mod den negative elektrode, hvis et protein placeres i en opløsning med en pH lavere end dets isoelektriske punkt.Tværtimod rykker det til den positive pol.Fordi hastigheden af proteinmolekyler, der bevæger sig i et elektrisk felt, er relateret til deres ladning, formen og størrelsen af molekylerne, kan forskellige proteiner adskilles ved elektroforese.Serum indeholder en række forskellige proteiner, som alle har isoelektriske punkter ved pH 7,5 eller mindre.Når serum placeres i pH 8,6 buffer for at køre elektroforese, er alle serumproteiner negativt ladede og vil bevæge sig mod den positive side i det elektriske felt.Da forskellige serumproteiner har forskellige ladninger ved samme pH, er de molekylære partikler forskellige i størrelse, og derfor er migrationshastigheden forskellig, og de adskilles ved elektroforese.De isoelektriske punkter og molekylvægte af serumproteiner er vist i tabellen nedenfor:
| Protein | Isoelektriske punkter (PI) | Molekylær vægt |
| Albumin | 4,88 | 69.000 |
| α1-gloulin | 5.00 | 200.000 |
| α2-gloulin | 5.06 | 300.000 |
| β-gloulin | 5.12 | 9.000~150.000 |
| y-gloulin | 6,85~7,50 | 156.000~ 300.000 |
Forsøget går ud på at adskille forskellige proteiner i blodserum med celluloseacetatmembran (forkortet CAM) som støttemedie.CAM er en slags opskummet loosefilm med god ensartethed, og tykkelsen er 0,1 mm-1,5 mm, som har en vis vandabsorption.
Materialer, instrumenter og reagenser til CAM-elektroforese
Prøver:sundt humant blodserum
Instrument:strømforsyning DYY-6C, elektroforesetank DYCP-38C, overlegen prøvebelastning WD-9404
Reagenserne
1) celluloseacetatmembran 7X9cm
2) PH 8,6 barbitol-bufferopløsning (ionstyrke 0,05-0,09, det er 0,06 gange tid.): Tag 1,84 g diethylbarbitursyre, og tag derefter 1,03 g diethylnatriumpentobarbital, tilsæt lidt destilleret vand til opvarmning for at opløses, og lav op til 1000 ml;
3) Plet: Ponceau S 0,2 g, trichloreddikesyre 3 g, tilsæt 100 ml destilleret vand;
4) TBS/T eller PBS/T: 45 ml 95% ethanol, 5 ml iseddikesyre, tilsæt 50 ml destilleret vand;
5) Rengøringsopløsning: 70 ml vandfri ethanol, 30 ml iseddike.
Eksperiment Method
1) Klargør membranen: Nedsænk membranen i barbitolbufferopløsningen 30min-8 timer, og tag den ud, fjern den ekstra opløsning med absorberende papir.
2) Indlæsning af prøver: Skeln den ru side og den glatte side af membranen, og marker en streg i 1,5 cm afstand til den øverste ende på den ru side.Indlæs prøver med overlegen prøveindlæsningsværktøj på den ru side.Bemærk: Prøverne skal placeres på den ru side af membranen.Efter at serumprøverne er helt penetreret ind i membranen, vendes membranen om, den ru side (med prøver) vendes ned mod tanken, og enden med prøver placeres i negativ elektrode.
3) Elektroforese: Tænd for strømforsyningen, 0,4～0,6m A/cm membran, køretiden er 30-45 min.Efter at have kørt elektroforese, sluk for strømmen.
4) Plet og rengør: Tag membranen ud af tanken, og nedsænk denit i farveopløsningen i 5 min, og rengør den derefter i renseopløsningen igen og igen i 3-4 gange, indtil baggrundsfarven er klar.Serumproteinerne skal vises på båndene, og normalt er der fem zoner, der danner den øverste ende til den markerede linje, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Konservering: læg den tørre elektroforesebandi rengøringsopløsning i 10-15 minutter, og tag det derefter ud og sæt det på et rent glas, efter at det tørrer, bliver det en gennemsigtig filmband.
EksperimentResultat
Separationseffekten af serumprøver er god, og der er ikke noget båndhalefænomen.Repeterbarheden af resultaterne varierer på grund af testprocedurerne og forsøgslederens metoder, og repeterbarheden er høj.
Konklusion
Det hurtige kliniske elektroforesedetektionssystem (Elektroforese tankDYCP-38C,StrømforsyningDYY-6C og overlegen prøvebelastning WD-9404) produceret af voresfirma Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdopfylder de eksperimentelle krav,ogresultaterne er reproducerbare, enkle og hurtige, velegnede tilundervisningforskning.
Beijing LiuyiBiotechnology Co., Ltd er specialiseret i fremstilling af elektroforeseprodukter til life science-industrien, somhar mere end 50 års historie i Kina, og virksomheden kan levere stabile og højkvalitetsprodukter over hele verden.Gennem mange års udvikling er den værdig til dit valg!
Vi søger nu partnere, både OEM elektroforesetank og distributører er velkomne.
For mere information om os, kontakt os venligst via e-mail[e-mailbeskyttet]eller[e-mailbeskyttet].
Indlægstid: 14-november 2022