Hvad er polyacrylamidgelelektroforese?

Polyakrylamid gelelektroforese

Gelelektroforese er en grundlæggende teknik i laboratorier på tværs af de biologiske discipliner, der tillader adskillelse af makromolekyler såsom DNA, RNA og proteiner. Forskellige separationsmedier og -mekanismer gør det muligt at adskille undergrupper af disse molekyler mere effektivt ved at udnytte deres fysiske egenskaber. Især for proteiner er polyacrylamidgelelektroforese (PAGE) ofte den foretrukne teknik.

PAGE er en teknik, der adskiller makromolekyler såsom proteiner baseret på deres elektroforetiske mobilitet, det vil sige analytters evne til at bevæge sig mod en elektrode med den modsatte ladning. I PAGE er dette bestemt af ladningen, størrelsen (molekylvægten) og formen af ​​molekylet. Analytter bevæger sig gennem porer dannet i polyacrylamidgel. I modsætning til DNA og RNA varierer proteiner i ladning afhængigt af de inkorporerede aminosyrer, hvilket kan påvirke, hvordan de kører. Aminosyrestrenge kan også danne sekundære strukturer, der påvirker deres tilsyneladende størrelse og dermed hvordan de er i stand til at bevæge sig gennem porerne. Det kan derfor nogle gange være ønskeligt at denaturere proteiner før elektroforese for at linearisere dem, hvis et mere nøjagtigt estimat af størrelse er påkrævet.

SDS SIDE

Natrium-dodecylsulfat polyacrylamid gelelektroforese er en teknik, der bruges til at adskille proteinmolekyler med en masse på 5 til 250 kDa. Proteinerne adskilles udelukkende på basis af deres molekylvægt. Natriumdodecylsulfat, et anionisk overfladeaktivt stof, tilsættes ved fremstillingen af ​​geler, der maskerer proteinprøvernes iboende ladninger og giver dem et tilsvarende forhold mellem ladning og masse. Med enkle ord denaturerer det proteinerne og giver dem en negativ ladning.

Native PAGE

Native PAGE er en teknik, der bruger ikke-denaturerede geler til adskillelse af proteiner. I modsætning til SDS PAGE tilsættes intet denatureringsmiddel ved fremstillingen af ​​geler. Som følge heraf sker adskillelsen af ​​proteiner på basis af proteinernes ladning og størrelse. I denne teknik er konformationen, foldningen og aminosyrekæderne af proteinerne de faktorer, som adskillelsen er afhængig af. Proteinerne beskadiges ikke i denne proces og kan genvindes efter afslutningen af ​​adskillelsen.

Hvordan fungerer polyacrylamidgelelektroforese (PAGE)?

Det grundlæggende princip for PAGE er at adskille analytter ved at føre dem gennem porerne i en polyacrylamidgel ved hjælp af en elektrisk strøm. For at opnå dette polymeriseres en akrylamid-bisacrylamid-blanding (polyacrylamid) ved tilsætning af ammoniumpersulfat (APS). Reaktionen, som katalyseres af tetramethylethylendiamin (TEMED), danner en netlignende struktur med porer, som analytter kan bevæge sig igennem (figur 2). Jo højere procentdel af total akrylamid, der er inkluderet i gelen, jo mindre er porestørrelsen, derfor desto mindre er de proteiner, der vil kunne passere igennem. Forholdet mellem akrylamid og bisacrylamid vil også påvirke porestørrelsen, men dette holdes ofte konstant. Mindre porestørrelser reducerer også den hastighed, hvormed små proteiner er i stand til at bevæge sig gennem gelen, hvilket forbedrer deres opløsning og forhindrer dem i at løbe hurtigt ud i bufferen, når der påføres strøm.

Udstyr til polyakrylamidgelelektroforese

Gelelektroforesecelle (tank/kammer)
Geltanken til polyacrylamidgelelektroforese (PAGE) er forskellig fra agarosegeltanken. Agarosegeltanken er vandret, mens PAGE-tanken er lodret. Ved lodret elektroforesecelle (tank/kammer) hældes en tynd gel (normalt 1,0 mm eller 1,5 mm) mellem to glasplader og monteres således, at bunden af ​​gelen er nedsænket i buffer i det ene kammer, og toppen er nedsænket i buffer. i et andet kammer. Når der påføres strøm, migrerer en lille mængde buffer gennem gelen fra det øverste kammer til det nederste kammer. Med stærke klemmer for at sikre, at samlingen forbliver i en oprejst position, letter udstyret hurtige gelløb med jævn afkøling, hvilket resulterer i tydelige bånd.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) fremstiller en række størrelser af polyacrylamidgelelektroforeseceller (tanke/kamre). Modellerne DYCZ-20C og DYCZ-20G er vertikale elektroforeseceller (tanke/kamre) til DNA-sekventeringsanalyse. Nogle af de vertikale elektroforeseceller (tanke/kamre) er kompatible med blotting-system, ligesom modellen DYCZ-24DN, DYCZ-25D og DYCZ-25E er kompatible med Western Blotting-system model DYCZ-40D, DYCZ-40G og DYCZ-40F, som bruges til at overføre proteinmolekylet fra gelen til membranen. Efter SDS-PAGE-elektroforese er Western Blotting en teknik til at detektere et specifikt protein i en proteinblanding. Du kan vælge disse blotting-systemer i henhold til de eksperimentelle krav.

Elektroforese strømforsyning
For at levere elektricitet til at køre gelen, skal du bruge en elektroforesestrømforsyning. Hos Liuyi Biotechnology leverer vi en række elektroforesestrømforsyninger til alle applikationer. Modellen DYY-12 og DYY-12C med høj stabil spænding og strøm kan opfylde højspændingskrav elektroforese. Den har funktionen som stand, timing, VH og trin-for-trin applikation. De er ideelle til IEF- og DNA-sekventeringselektroforeseanvendelse. Til generel anvendelse af protein- og DNA-elektroforese har vi modellen DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 og så videre, som også er varme salgsstrømforsyninger med elektroforeseceller (tanke/kamre). Disse kan bruges til mellem- og lavspændingselektroforeseapplikationer, såsom til skolelabbrug, hospitalslaboratorier og så videre. Flere modeller til strømforsyninger, besøg venligst vores hjemmeside.

Liuyi-mærket har mere end en 50-årig historie i Kina, og virksomheden kan levere stabile produkter af høj kvalitet over hele verden. Gennem mange års udvikling er det dit valg værd!

For mere information om os, kontakt os venligst via e-mail[e-mail beskyttet] or [e-mail beskyttet].

Referencer til Hvad er polyacrylamidgelelektroforese?
1. Karen Steward PhD polyakrylamidgelelektroforese, hvordan det virker, teknikvarianter og dets anvendelser