Indledning
Gelelektroforese er en grundlæggende teknik inden for molekylærbiologi, som i vid udstrækning anvendes til adskillelse af proteiner, nukleinsyrer og andre makromolekyler. Korrekt kontrol af prøvevolumen, spænding og elektroforesetid er afgørende for at opnå nøjagtige og reproducerbare resultater.Vores laboratoriekollega tilbyderbedste praksis til styring af disse parametre under SDS-PAGE gelelektroforese.
Beijing Liuyi Bioteknologi gel elektroforese produkter
Prøvevolumen: Sikring af konsistens
Når du udfører SDS-PAGE-elektroforese, er prøvevolumenet en nøglefaktor, som kan påvirke opløsningen af dine resultater markant. Det anbefales generelt at fylde 10 µL totalt protein pr. brønd. For at sikre konsistens og forhindre prøvediffusion mellem tilstødende brønde, er det vigtigt at fylde et lige så stort volumen 1x belastningsbuffer i alle tomme brønde. Denne forholdsregel hjælper med at forhindre spredning af prøver til nabobaner, hvilket kan forekomme, hvis brønden efterlades tom.
Før du indlæser dine prøver, skal du altid starte med at tilføje en molekylvægtmarkør til en brønd. Dette giver mulighed for nem identifikation af proteinstørrelser efter elektroforese.
Spændingskontrol: Balancering af hastighed og opløsning
Spændingen påført under elektroforese påvirker direkte både den hastighed, hvormed prøverne migrerer gennem gelen, og opløsningen af separationen. For SDS-PAGE er det tilrådeligt at starte med en lav spænding på omkring 80V. Denne indledende lave spænding gør det muligt for prøverne at migrere langsomt og jævnt og koncentrere dem i et skarpt bånd, når de kommer ind i den adskillende gel.
Når prøverne er kommet helt ind i separationsgelen, kan spændingen øges til 120V. Denne højere spænding accelererer migrationen, hvilket sikrer, at proteinerne adskilles effektivt i henhold til deres molekylvægt. Det er vigtigt at overvåge fremskridtene af bromphenolblå farvestoffronten, hvilket indikerer afslutningen af elektroforesen. For geler med en koncentration på 10-12% er 80-90 minutter typisk tilstrækkeligt; for 15 % geler kan det dog være nødvendigt at forlænge køretiden lidt.
Tidsstyring: At vide, hvornår du skal stoppe
Timing er en anden kritisk faktor i gelelektroforese. At køre gelen i for lang eller for kort periode kan føre til suboptimal adskillelse. Migrationen af bromphenolblåt farvestof er en nyttig indikator: når den når bunden af gelen, er det normalt tid til at stoppe løbeturen. For standardgeler, såsom 10-12%, er en elektroforesevarighed på ca. 80-90 minutter typisk tilstrækkelig. For højere procent geler, såsom 15 %, bør køretiden forlænges for at sikre fuldstændig adskillelse af proteiner.
Bufferstyring: Genbrug og klargøring af buffere
Elektroforesebuffer kan genbruges 1-2 gange, afhængigt af dit laboratoriums specifikke forhold. For optimale resultater anbefales det dog at forberede frisk 10x buffer og fortynde den lige før brug. Dette sikrer, at bufferen bevarer sin effektivitet, hvilket fører til mere pålidelige elektroforeseresultater.
Beijing Liuyi Bioteknologi gel elektroforese produkter
Ved omhyggeligt at kontrollere prøvevolumen, spænding og elektroforesetid kan du forbedre nøjagtigheden og reproducerbarheden af dine gelelektroforeseresultater markant. Implementering af disse bedste praksisser i dit laboratoriearbejde vil hjælpe dig med at opnå klarere og mere tydelige bånd, hvilket fører til bedre data til downstream-analyse.
Hvis du har flere gode metoder til at optimere gelelektroforeseeksperiment, velkommen til at diskutere med os!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har specialiseret sig i fremstilling af elektroforeseinstrumenter i mere end 50 år med vores eget professionelle tekniske team og R&D-center. Vi har pålidelig og komplet produktionslinje fra design til inspektion og lager samt marketingsupport. Vores hovedprodukter er Elektroforese Cell (tank/kammer), Elektroforese Strømforsyning, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System osv. Vi leverer også laboratorieinstrumenter som PCR instrument, vortex mixer og centrifuge til laboratoriet.
Hvis du har en købsplan for vores produkter, så tøv ikke med at kontakte os. Du kan sende os en besked på e-mail[e-mail beskyttet]eller[e-mail beskyttet], eller ring til os på +86 15810650221 eller tilføj Whatsapp +86 15810650221 eller Wechat: 15810650221.
Scan QR-koden for at tilføje på Whatsapp eller WeChat.
Indlægstid: 20. august 2024