Gelelektroforese er en af de vigtigste metoder, der anvendes i molekylærbiologi til analyse af DNA. Denne metode involverer migrering af fragmenter af DNA gennem en gel, hvor de adskilles baseret på størrelse eller form. Men har du nogensinde stødt på fejl under dine elektroforeseeksperimenter, såsom udtværede bånd på agarosegelen, eller ingen bånd på gelen? Hvad kan være årsagen til disse fejl?
Vores teknikere har opsummeret et par fejlfinding her til din reference.
1. Smørte bånd på agarosegel
●DNA'et blev nedbrudt. Undgå nukleasekontamination.
● Elektroforesebufferen er ikke frisk. Efter gentagen brug af elektroforesebuffer falder ionstyrken, og dens pH-værdi stiger, så bufferkapaciteten svækkes, hvilket påvirker elektroforeseeffekten. Det anbefales at udskifte elektroforesebufferen ofte.
● Der blev anvendt forkerte elektroforesebetingelser. Lad ikke spændingen overstige 20 V/cm, og hold en temperatur <30°C under elektroforese. For den gigantiske DNA-strengelektroforese skal temperaturen være <15° C. Tjek, at elektroforesebufferen har tilstrækkelig bufferkapacitet.
● Der blev lagt for meget DNA på gelen. Reducer mængden af DNA.
● For meget salt i DNA'et. Brug ethanoludfældning til at fjerne overskydende salte i avanceret.
● DNA'et var forurenet med protein. Brug phenol ekstraktioner til at fjerne protein i avanceret.
● DNA'et blev denatureret. Opvarm ikke før elektroforese. Fortynd DNA i buffer med 20 mM NaCl.
2. Anomalier DNA-bånd migration
● Renaturering af COS-stedet for λHind III-fragmentet. Opvarm DNA i 5 minutter under 65°C før elektroforese, og afkøl det derefter på isenhed i 5 minutter.
● Der blev anvendt forkerte elektroforesebetingelser. Lad ikke spændingen overstige 20 V/cm, og hold en temperatur <30°C under elektroforese. Kontroller, at elektroforesebufferen har tilstrækkelig bufferkapacitet.
● DNA'et blev denatureret. Opvarm ikke før elektroforese. Fortynd DNA i buffer med 20 mM NaCl.
3. Svage eller ingen DNA-bånd på agarosegel
● Der var utilstrækkelig mængde eller koncentration af DNA påsat gelen. Øg mængden af DNA. Polyacrylamidgelelektroforese er lidt mere følsom end agaroseelektroforese, og prøvebelastningen kan reduceres passende.
● DNA'et blev nedbrudt. Undgå nukleasekontamination.
● DNA'et blev elektroforeret af gelen. Elektrofores gelen i kortere tid, brug en lavere spænding, eller brug en højere procent gel.
● Forkert W-lyskilde blev brugt til visualisering af ethidiumbromid-farvet DNA. Brug en kortbølgelængde (254 nm) W lys for større følsomhed.
4. DNA-bånd mangler
●Den lille størrelse DNA blev elektroforesebehandlet fra gelen. Elektrofores gelen i kortere tid, brug en lavere spænding, eller brug en højere procent gel.
● Svært at skelne DNA-båndene af lignende molekyler. Øg elektroforesetiden, og kontroller koncentrationenaf gelen for at sikre, at den korrekte procentdel af gelen skal bruges.
● DNA'et blev denatureret. Opvarm ikke før elektroforese. Fortynd DNA i buffer med 20 mM NaCl.
● DNA-strengene er enorme, og konventionel gelelektroforese er ikke egnet. Analyser på pulsgelelektroforese.Hvilke andre problemer har du haft med agarosegelelektroforese? Vi vil undersøge mere for guider i fremtiden.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) er en specialiseret virksomhed med fokus på elektroforese-relaterede produkter i Kina. Dens historie starter i 1970, da Kina endnu ikke var gået ind i reformen og åbningstiden. Gennem mange års udvikling har Liuyi Bitotech sit eget mærke, der er kendt som Liuyi Brand på hjemmemarkedet for elektroforeseprodukter.
Liuyi-mærket har mere end en 50-årig historie i Kina, og virksomheden kan levere stabile produkter af høj kvalitet over hele verden. Gennem mange års udvikling er det dit valg værd!
Liuyi Biotechs horisontale elektroforeseceller (tanke/kamre) er af høj kvalitet med et godt udseende. Med forskellige størrelser af gelbakker kan de opfylde dine forskellige eksperimentelle krav. Vi har vores eget tekniske team og fabrik. Fra design til fremstilling, råmaterialerne til de vigtigste dele, vi kan kontrollere hele processen. DYCP 31-serien er til DNA-elektroforese, som er modelDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, ogDYCP-31E. Forskellene mellem dem er gelstørrelser og pris. Vi leverer produkter i fuld størrelse til vores kunder. ModellenDYCP-32Ckan lave den største gel 250mm*250mm.
I mellemtiden anbefaler vi vores elektroforesestrømforsyningDYY-6C,DYY-6DogDYY-10Ctil vores elektroforeseceller (tanke/kamre) DYCP-31 og 32 serier.
Hvis du ønsker mere information om produkterne, så besøg venligst denne hjemmeside for at få mere, og velkommen til at kontakte os via e-mail for at fortælle os, hvad du ønsker, og se om vi kan levere løsningerne til dig.
For mere information om os, kontakt os venligst via e-mail[e-mail beskyttet], [e-mail beskyttet].
Indlægstid: maj-09-2022