Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) er en følsom og hurtig teknik, der primært bruges til at opdage DNA-skader og reparation i individuelle celler. Navnet "Comet Assay" kommer fra den karakteristiske kometlignende form, der vises i resultaterne: Cellens kerne danner "hovedet", mens de beskadigede DNA-fragmenter migrerer og skaber en "hale", der ligner en komet.
Princip
Princippet i Comet Assay er baseret på migration af DNA-fragmenter i et elektrisk felt. Intakt DNA forbliver i cellekernen, mens beskadiget eller fragmenteret DNA migrerer mod anoden og danner kometens "hale". Halens længde og intensitet er direkte proportional med omfanget af DNA-skade.
Procedure
- Celleforberedelse: Celler, der skal testes, blandes med agarose med lavt smeltepunkt og spredes på objektglas for at danne et ensartet lag.
- Cellelyse: Objektglassene nedsænkes i en lyseringsopløsning for at fjerne cellemembranen og kernemembranen og blotlægge DNA'et.
- Elektroforese: Objektglassene placeres i et elektroforesekammer under alkaliske eller neutrale forhold. Beskadigede DNA-fragmenter migrerer mod den positive elektrode under påvirkning af det elektriske felt.
- Farvning: Efter elektroforese farves objektglassene med et fluorescerende farvestof (f.eks. ethidiumbromid) for at visualisere DNA'et.
- Mikroskopisk analyse: Ved hjælp af et fluorescensmikroskop eller specialiseret software analyseres kometformerne, og parametre som halenlængde og intensitet måles.
Billede fra biorender
Dataanalyse
Resultater fra Comet Assay evalueres ud fra flere nøgleparametre:
- Halelængde: Repræsenterer den afstand, som DNA'et migrerer, hvilket angiver omfanget af DNA-skade.
- Halens DNA indhold: Den procentdel af DNA, der migrerer ind i halen, bruges ofte som et kvantitativt mål for DNA-skade.
- Olive Tail Moment (OTM): Kombinerer både halelængde og hale-DNA-indhold for at give et mere omfattende mål for DNA-skader.
Ansøgninger
- Genotoksicitetsundersøgelser: Comet Assay er meget brugt til at vurdere virkningerne af kemikalier, lægemidler og stråling på celle-DNA, hvilket gør det til et nøgleværktøj til genotoksicitetstestning.
- Miljøtoksikologi: Det hjælper med at analysere virkningen af miljøforurenende stoffer på organismers DNA og giver indsigt i økosystemsikkerhed.
- Medicinsk og klinisk forskning: Comet Assay bruges til at studere DNA-reparationsmekanismer, cancer og andre DNA-relaterede sygdomme. Den evaluerer også virkningen af kræftbehandlinger som strålebehandling og kemoterapi på DNA.
- Fødevare- og landbrugsvidenskab: Bruges til at vurdere sikkerheden af pesticider, fødevaretilsætningsstoffer og andre stoffer og til at studere deres toksiske virkninger i dyremodeller.
Fordele
- Høj følsomhed: I stand til at detektere lave niveauer af DNA-skade.
- Enkel betjening: Teknikken er ligetil, hvilket gør den velegnet til high-throughput screening.
- Bred anvendelse: Det kan anvendes på forskellige celletyper, herunder dyre- og planteceller.
- Kvantificeringsudfordringer: Mens den giver kvalitative data om DNA-skader, er kvantitativ analyse stærkt afhængig af software og billedanalyseteknikker.
- Eksperimentelle forhold: Resultater kan påvirkes af faktorer som elektroforesetid og pH, hvilket kræver omhyggelig kontrol af eksperimentelle forhold.
Begrænsninger
Comet Assay er et uvurderligt værktøj inden for biomedicinsk forskning, miljøvidenskab og lægemiddeludvikling på grund af dets fleksibilitet og høje følsomhed til at opdage DNA-skader og reparation. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)tilbyder vandret elektroforesekammer til kometassay. Velkommen til at kontakte os for at diskutere omComet Assayprotokol.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har specialiseret sig i fremstilling af elektroforeseinstrumenter i mere end 50 år med vores eget professionelle tekniske team og R&D-center. Vi har pålidelig og komplet produktionslinje fra design til inspektion og lager samt marketingsupport. Vores hovedprodukter er Elektroforese Cell (tank/kammer), Elektroforese Strømforsyning, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System osv. Vi leverer også laboratorieinstrumenter som PCR instrument, vortex mixer og centrifuge til laboratoriet.
Hvis du har en købsplan for vores produkter, så tøv ikke med at kontakte os. Du kan sende os en besked på e-mail[e-mail beskyttet]eller[e-mail beskyttet], eller ring til os på +86 15810650221 eller tilføj Whatsapp +86 15810650221 eller Wechat: 15810650221.
Scan QR-koden for at tilføje på Whatsapp eller WeChat.
Indlægstid: 20. september 2024