Grundlæggende teknikker til agarosegelelektroforese(2)

Prøveforberedelse ogIndlæser

På grund af brugen af ​​et kontinuerligt buffersystem uden stablegel i de fleste tilfælde, bør prøverne have en passende koncentration og et lille volumen. Brug enpipettetil langsomt at tilsætte prøven med 5-10 μg pr. brønd for at undgå et signifikant fald i opløsning. Nårindlæsning af prøve, skal strømforsyningen være slukket. Prøven bør indeholde et indikatorfarvestof (0,025 % bromphenolblåt eller orange) og saccharose (10-15 %) eller glycerol (5-10 %) for at øge dens tæthed, koncentrere prøven og forhindre diffusion. Men nogle gange kan saccharose eller glycerol forårsage U-formede bånd i elektroforeseresultater, hvilket kan undgås ved at bruge 2,5 % Ficoll (polyvinylpyrrolidon).

Elektroforese

Spændingen til elektroforese er 5-15 V/cm, generelt omkring 10 V/cm. Til adskillelse af store molekyler bør spændingen være lavere, normalt ikke over 5 V/cm.

Farvning

Fluorescerende farvestof ethidiumbromid (EB) bruges almindeligvis til farvning for at observere DNA-bånd i agarosegel. EB kan indsætte mellem basepar af DNA-molekyler, hvilket får EB til at binde med DNA. Absorptionen af ​​260 nm ultraviolet lys af DNA overføres til EB, og det bundne EB udsender fluorescens ved 590 nm i det rød-orange område af det synlige lysspektrum. Farvning af gelen i en 1 mmol/L MgSO4-opløsning i 1 time kan reducere baggrundsfluorescens forårsaget af ubundet EB, hvilket letter påvisningen af ​​små mængder DNA.

EB farvestof har flere fordele: det er nemt at bruge, bryder ikke nukleinsyrer, har høj følsomhed og kan farve både DNA og RNA. EB kan tilsættes til prøven og spores ved hjælp af UV-absorption til enhver tid. Efter farvning kan EB fjernes ved ekstraktion med n-butanol.

Imidlertid er EB-farvestof et potent mutagen, og forholdsregler, såsom at bære polyethylenhandsker, bør tages under håndtering. Acridin orange er også et almindeligt anvendt farvestof, fordi det kan skelne mellem enkeltstrengede og dobbeltstrengede nukleinsyrer (DNA, RNA). Den udviser grøn fluorescens (530 nm) for dobbeltstrengede nukleinsyrer og rød fluorescens (640 nm) for enkeltstrengede nukleinsyrer. Derudover kan andre farvestoffer såsom methylenblåt, methylengrønt og quinolin B bruges til farvning.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har specialiseret sig i fremstilling af elektroforeseinstrumenter i mere end 50 år med vores eget professionelle tekniske team og R&D-center. Vi har pålidelig og komplet produktionslinje fra design til inspektion og lager samt marketingsupport. Vores hovedprodukter er Elektroforesecelle (tank/kammer), Elektroforesestrømforsyning, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System osv.

Vi søger nu partnere, både OEM elektroforesetank og distributører er velkomne.

Hvis du har en købsplan for vores produkter, så tøv ikke med at kontakte os. Du kan sende os en besked på e-mail[e-mail beskyttet]eller[e-mail beskyttet], eller ring til os på +86 15810650221 eller tilføj Whatsapp +86 15810650221 eller Wechat: 15810650221.

Scan QR-koden for at tilføje på Whatsapp eller WeChat.