1. Klassifikation
Gelelektroforese er opdelt i lodrette typer (herunder søjlegeler og pladegeler) og horisontale typer (hovedsagelig pladegeler) (Figur 6-18). Generelt er lodret adskillelse lidt bedre end vandret, men vandret gelpræparation har mindst fire fordele: der er støtte under hele gelen, hvilket tillader brugen af lavkoncentrations agarose; det er muligt at fremstille agarosegelplader med forskellige specifikationer; gelforberedelse og prøvefyldning er mere bekvemt; elektroforesekammeret er let at konstruere og omkostningseffektivt. Da vandret elektroforese udføres med agarosegelpladen helt nedsænket omkring 1 mm under overfladen af elektroforesebufferen, kaldes det også neddykket elektroforese.
Elektroforesetank DYCP-31DN til agarosegelelektroforese
2. Buffersystem
Ved nukleinsyreseparation anvender de fleste systemer kontinuerlige systemer. Almindeligt anvendte elektroforesebuffere omfatter TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L borsyre, 0,0024mol/L EDTA) buffer og THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L natriumacetat, 0,0018 mol/L EDTA) buffer. Disse buffere fremstilles generelt som 10x stamopløsninger og fortyndes til den nødvendige koncentration, når de er i brug. Migrationshastighederne for lineært og cirkulært DNA i agarosegel varierer med den anvendte buffer. I THE buffer er migrationshastigheden for lineært DNA større end for cirkulært DNA, mens det i TBE-buffer er det modsatte.
3. Fremstilling af Agarose Gel
(1) Fremstilling af horisontal agarosegel
(a) Forbered den nødvendige koncentration af agarosegel ved hjælp af 1x elektroforesebuffer.
(b) Opvarm agarosen til fuldstændig opløsning enten i et kogende vandbad, på en magnetomrører eller i en mikrobølgeovn. Afkøl agaroseopløsningen til 55 °C og tilsæt ethidiumbromid (EB) farvestof til en slutkoncentration på 0,5 μg/ml.
(c) Forsegl kanterne på glas- eller akrylplader med en lille mængde agarosegel, tilsæt en kam, og placer kamtænderne omkring 0,5~1,0 mm over pladen.
(d) Hæld den smeltede agarosegelopløsning kontinuerligt i glas- eller akrylpladeformen (tykkelsen afhænger af volumen af DNA-prøven), og undgå indføring af luftbobler. Lad det størkne naturligt ved stuetemperatur.
(e) Fjern forsigtigt kammen efter fuldstændig størkning. Tilføj en passende mængde elektroforesebuffer til geltanken, og sørg for, at gelpladen er nedsænket ca. 1 mm under overfladen af elektroforesebufferen.
(2) Fremstilling af vertikal agarosegel
(a) Fjern fedt eller rester fra glaspladerne ved at vaske med ethanol.
(b) Placer afstandsplader mellem for- og bagdæmninger, flugt kanterne af afstandspladerne med de forreste og bageste dæmninger, og fastgør dem med klemmer.
(c) Tilsæt 2% agarose i 1x buffer mellem kanterne af afstandspladerne for at danne en 1 cm høj agaroseprop i bunden af gelstøbekammeret.
(d) Hæld den smeltede agarosegel i den ønskede koncentration, fremstillet i 1x buffer, i gelkammeret op til 1 cm under toppen.
(e) Indsæt kammen, undgå at fange luftbobler under kammens tænder. Nogle gange kan der forekomme rynker ved kamtænderne under afkøling af agarosegel; i sådanne tilfælde skal du blot tilføje lidt smeltet agarose øverst for at størkne den.
(f) Fjern kammen. For at forhindre bufferlækage i påfyldningsåbningen, forsegle forbindelsen mellem agarosegelpladen og elektroforesekammeret med 2 % agarose og tilsæt den nødvendige mængde buffer.
(g) Tilføj 1x elektroforesebuffer til gelkammeret.
(h) Læg forsigtigt DNA-prøver på agarosegelen under bufferen.
Mere information om den grundlæggende viden om agarosegelelektroforese deler vi i næste uge. Ønsker, at disse oplysninger kan være nyttige for dit eksperiment.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har specialiseret sig i fremstilling af elektroforeseinstrumenter i mere end 50 år med vores eget professionelle tekniske team og R&D-center. Vi har pålidelig og komplet produktionslinje fra design til inspektion og lager samt marketingsupport. Vores hovedprodukter er Elektroforesecelle (tank/kammer), Elektroforesestrømforsyning, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System osv.
Vi søger nu partnere, både OEM elektroforesetank og distributører er velkomne.
Hvis du har en købsplan for vores produkter, så tøv ikke med at kontakte os. Du kan sende os en besked på e-mail[e-mail beskyttet]eller[e-mail beskyttet], eller ring til os på +86 15810650221 eller tilføj Whatsapp +86 15810650221 eller Wechat: 15810650221.
Scan QR-koden for at tilføje på Whatsapp eller WeChat.
Posttid: Dec-07-2023